大腸桿菌感受態細胞表達分析

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell

大腸桿菌感受態細胞

產品標簽：

BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；Kanamycin（kan）卡那mei素；Carbenicillin 羧芐青mei素；In-fusion 一步法克隆檢測試劑盒；

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產品組分：

菌株描述

BL21 (DE3) pLysS菌株攜帶質粒pLysS，具有氯mei素抗性。pLysS含有表達T7溶jun酶的基因，T7溶jun 酶能夠作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，從而能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區（DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶）。

BL21 (DE3) pLysS菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pLysS Camr

產品描述

本品是大腸桿菌BL21(DE3)pLysS菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率可達107 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1）感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2）最好在冰上融化感受態細胞。

3）進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4）為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

5）產品包裝內含質粒pUC19 DNA(0.1ng/μl)，供對照實驗用。

6）BL21(DE3)pLysS菌株攜帶質粒pLysS，除復蘇培養基不含抗生素外，其余所用培養基/培養液均應含34μg/ml氯mei素，以防止質粒丟失。

7）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1）取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管內，置于冰浴中。【注意：一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據實際情況分裝使用。需注意所用DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。】以下實驗以50 μl感受態細胞為例。

2）向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴靜置30min。

3）42℃熱擊45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。

4）向每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，150 rpm振蕩培養45min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5）根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收， 倒置培養，37℃培養12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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